Screening of acetylcholinesterase inhibitors in marine organisms from the Caribbean Sea.

The acetylcholinesterase inhibitory activity of 89 organic extracts from marine organisms was evaluated through a TLC bioautography methodology. Extracts from soft corals (Eunicea and Plexaura) were the most active compared with extracts from sponges. The bioguided chemical study of the most active extract, obtained from Pseudoplexaura porosa, led to the isolation of a diterpene with spectroscopic properties consistent to those published to the cembrane Steylolide. However, further analysis by X-ray diffraction indicated that the compound was the 14-acetoxycrassine (1), correcting the structure reported to the Styelolide. Additionally, the acetylcholinesterase inhibitory activity of fourteen cembranoids (2-15) isolated from soft corals Eunicea knighti and Pseudoplexaura flagellosa was evaluated. Cembranoids 2, 3 and 4 were the most active compounds in the TLC bioassay. Then, the most promising cembranoids, 14-acetoxycrassine (1) and asperdiol (2), were tested quantitatively and they exhibited IC50 values of 1.40 ± 0.113 and 0.358 ± 0.130 µM, respectively.

Vías de carcinogénesis colorrectal y sus implicaciones clínicas / Pathways of colorectal carcinogenesis and their clinical implications

El cáncer colorrectal (CCR) es la cuarta causa de mortalidad por cáncer en Colombia y en el mundo, en ambos sexos; por esta razón, es considerado un problema de salud pública. El CCR es altamente heterogéneo en su fenotipo y genotipo, lo que está en relación con las diferentes vías de carcinogénesis descritas que implican diferentes mecanismos de progresión y agresividad de la enfermedad. Las vías clásicas, supresora y mutadora, se caracterizan por una serie de alteraciones genéticas relacionadas con los cambios fenotípicos de la progresión morfológica en la secuencia adenoma-carcinoma. Las vías alternas, originadas por mutaciones en los genes, BRAF y KRAS, se relacionan con la progresión de pólipo aserrado a carcinoma. Conocer estas vías es muy importante para comprender la enfermedad de manera integral y profundizar en el estudio de sus mecanismos de control, que incluyen: diagnóstico temprano, tratamiento y seguimiento.

Colorectal cancer (CRC) is ranked fourth among causes of cancer mortality in Colombia and in the world, for both genders; it is therefore regarded as a public health issue. CRC´s phenotype and genotype are highly heterogeneous, a fact related to the various carcinogenic pathways described, and which is also implicated in the different progression mechanisms and the aggressiveness of the disease. The classic pathways, suppressive and mutable, are characterized by a series of genetic alterations related to phenotype changes in the morphologic progression of the adenoma-carcinoma sequence. The alternate pathways, originated by BRAF and KRAS gene mutations, are linked to the serrated polyp progression to carcinoma. Knowledge of these pathwaysis very important in achieving a fuller understanding of the disease and for broadening the study of mechanisms for its control; these include: early diagnosis, treatment and follow-up.

Señalización asociada al receptor del factor de crecimiento similar a la insulina de tipo I en una línea celular colombiana de carcinoma mamario / Insulin-like growth factor receptor I signaling in a breast cancer cell line

Introducción. Varios estudios in vitro sugieren que la proliferación, migración y supervivencia en líneas celulares de cáncer de seno se ven significativamente afectadas por la activación del receptor IGF de tipo I (Insulin-like Growth Factor-I Receptor, IGF-IR).Objetivo. Caracterizar la fosforilación del IGF-IR y las moléculas de señalización intracelular Akt y Erk1/2 (vías de señalización PI-3K y MAPK, respectivamente), causada por el factor IGF-I en una línea celular colombiana de cáncer de mama ductal infiltrante (CSC 1595). Materiales y métodos. Las líneas celulares CSC 1595 y MCF-7 se cultivaron en medio DMEM con suplemento de suero fetal bovino 10%, glutamina 2 mM, penicilina 100 U/ml, estreptomicina 100 µg/ml a 37 0C, atmósfera de CO2 al 5% y humedad de 95%. Los extractos celulares se sometieron a inmunoprecipitación e inmunodetección con anticuerpos específicos anti-pIGF-IR, anti-pERK1/2 y anti-pAkt. Resultados. Cinco minutos después del estímulo con 10 nM de IGF-I, 70% y 25% del IGF-IR fueron fosforilados en las células CSC 1595 y MCF-7, respectivamente; también se observó activación de las proteínas Akt y ERK1/2. Los niveles basales y estimulados de las proteínas ERK1/2 fueron significativamente más altos en las células CSC 1595, comparados a los observados en MCF-7. Conclusiones. El IGF-IR y la vía MAPK cinasa que involucra las proteínas ERK1/2 muestran una fosforilación mayor en las células 1595 a la observada en las MCF-7. El IGF-IR, principal activador de esta vía, podría jugar un papel importante en los procesos de proliferación y metástasis de tumores de cáncer de mama ductal infiltrante.

Introduction. In vitro studies strongly suggest that proliferation, migration and cell survival of breast cancer cell lines are significantly affected by activation of the IGF type 1 receptor (IGF-IR).Objective. The phosphorylation by IGF-I of IGF-IR and the intracellular signaling molecules Akt (PI-3K pathway) and Erk1/2 (MAPK pathway) was characterized in a human breast cancer cell lines. Materials and methods. The study compared a standard breast adenocarcinoma line (MCF-7) cell line with a line (CSC 1595) derived from an infiltrating ductal breast cancer in a Colombian patient. The CSC 1595 and MCF-7 cell lines were cultured in DMEM supplemented with 10% fetal bovine serum, 2 mM glutamine, 100 U/ml penicillin, and 100 µg/ml streptomycin and grown at 37°C in 5% CO2 atmosphere and 95% humidity. Cell extracts were prepared, followed by immunoprecipitation and immunoblotting with specific anti-pIGF-IR, anti-pERK1/2 and anti-pAkt antibodies. Results. After 5 minute stimulation with IGF-I, 70% of the IGF-IR was phosphorylated in the cell line CSC 1595 and 25% in MCF-7. In addition, Akt (oncogene protein v-akt) and ERK1/2 (extracellular signal-regulated MAP kinases) were phosphorylated. Basal and stimulated levels of phosphorylated ERK1/2 were substantially higher compared to those in the MCF-7 cell line. Conclusions. The IGF-IR and MAPK kinase pathway involving proteins ERK1/2 showed more significant phosphorylation in the 1,595 cells compared to the observed in the MCF-7 cell line. Since the IGF-IR is the major activator of this pathway it may play an important role in ductal infiltrating breast cancer tumor growth and metastases.

[Insulin-like growth factor receptor I signaling in a breast cancer cell line]. / Señalización asociada al receptor del factor de crecimiento similar a la insulina de tipo I en una línea celular colombiana de carcinoma mamario.

INTRODUCTION: In vitro studies strongly suggest that proliferation, migration and cell survival of breast cancer cell lines are significantly affected by activation of the IGF type 1 receptor (IGF-IR). OBJECTIVE: The phosphorylation by IGF-I of IGF-IR and the intracellular signaling molecules Akt (PI-3K pathway) and Erk1/2 (MAPK pathway) was characterized in a human breast cancer cell lines. MATERIALS AND METHODS: The study compared a standard breast adenocarcinoma line (MCF-7) cell line with a line (CSC 1595) derived from an infiltrating ductal breast cancer in a Colombian patient. The CSC 1595 and MCF-7 cell lines were cultured in DMEM supplemented with 10% fetal bovine serum, 2 mM glutamine, 100 U/ml penicillin, and 100 µg/ml streptomycin and grown at 37 °C in 5% CO2 atmosphere and 95% humidity. Cell extracts were prepared, followed by immunoprecipitation and immunoblotting with specific anti-pIGF-IR, anti-pERK1/2 and anti-pAkt antibodies. RESULTS: After 5 minute stimulation with IGF-I, 70% of the IGF-IR was phosphorylated in the cell line CSC 1595 and 25% in MCF-7. In addition, Akt (oncogene protein v-akt) and ERK1/2 (extracellular signal-regulated MAP kinases) were phosphorylated. Basal and stimulated levels of phosphorylated ERK1/2 were substantially higher compared to those in the MCF-7 cell line. CONCLUSIONS: The IGF-IR and MAPK kinase pathway involving proteins ERK1/2 showed more significant phosphorylation in the 1,595 cells compared to the observed in the MCF-7 cell line. Since the IGF-IR is the major activator of this pathway it may play an important role in ductal infiltrating breast cancer tumor growth and metastases.

LA ACTIVACIÓN DE LA VÍA DE SEÑALIZACIÓN PI3K/AKT POR EL FACTOR DE CRECIMIENTO SIMILAR A LA INSULINA TIPO II ESTIMULA LA EXPRESIÓN DEL mARN DE LA METALOPROTEINASA 9 EN CÉLULAS DE CORIOCARCINOMA / ACTIVATION OF THE PI3K/AKT SIGNALLING PATHWAY BY INSULIN-LIKE GROWTH FACTOR TYPE II STIMULATES METALLOPROTEINASE 9mRNA EXPRESSION IN CHORIOCARCINOMA CELLS / PERCURSO SINALIZAÇÃO PI3K/AKT ACTIVADO POR INSULINA-COMO FACTOR DE CRESCIMENTO TIPO II ESTIMULA METALOPROTEINASE 9 mARN EXPRESION CORIOCARCINOMA EM CÉLULAS

Las metaloproteinasas 2 y 9 (MMP-2 y MMP-9) y el inhibidor-1 de MMP (TIMP-1) podrían contribuir a la regulación del comportamiento invasivo de las células trofoblásticas, efecto que podría ser mediado por el factor de crecimiento similar a la insulina tipo II (IGF-II), el cual regula el desarrollo y la función del trofoblasto en la interfase materno-fetal. El objetivo de este estudio fue investigar el rol de la vía de señalización PI3K/AKT activada por IGF-II en la expresión de MMP-2 y MMP-9 involucradas en el proceso de invasión en la línea celular JEG-3, de coriocarcinoma humano. La expresión del mARN de MMP-2, MMP-9 y TIMP-1 fue evaluada, en dichas células, por la técnica de RT-PCR empleando diferentes dosis de IGF-II y diferentes condiciones, mientras que la vía de señalización fue evaluada usando la técnica de Western blot. Se encontró que el IGF-II no contribuye a la proliferación de las células trofoblásticas; sin embargo, este promueve la expresión del mARN de MMP-9 y TIMP-1 pero no de MMP-2, de forma dependiente de la dosis. El efecto en la expresión de MMP-9 es mediado a través de IGF-II por la activación de la vía de señalización PI3K/ AKT después de la fosforilación del receptor de IGF-I (IGF-IR). De acuerdo con los resultados, se propone un modelo en el cual la interacción de IGF-II con IGF-IR conduce a la activación de PI3K/AKT y la subsecuente expresión y activación de MMP-9. Esta activación es un requisito esencial para el proceso invasivo.

Metalloproteinases 2 and 9 (MMP-2 and MMP-9) and TissueInhibitor-1 ofMMPs (TIMP-1) could contribute to regulate the invasive behaviour of trophoblastic cells, effect which could be mediated by Insulin-like growth factor type II (IGF-II), which regulates the development and function of trophoblast at the foetal-maternal interface. The aim of this study was to investigate the role of the PI3K/AKT signalling pathway activated by IGF-II in the expression of MMP-2 and MMP-9 involved in the invasion process in the human choriocarcinoma cell line JEG-3. MMP-2, MMP-9 and TIMP-1 mARN expression in those cells were evaluated by RT-PCR using different IGF-II doses and conditions while signalling pathway was evaluated using Western blot. It was found that IGF-II does not contribute to trophoblastic cells proliferation, however, it promotes mARN expression of MMP-9 and TIMP-1, but not of MMP-2, in a dose-dependent way. The effect on MMP-9 expression is mediated through IGF-II activation of PI3K/AKT signalling pathway after phosphorylation of the IGF-I receptor (IGF-IR). According with the results a model is proposed in which the interaction of IGF-II with IGF-IR leads to PI3K/AKT activation and subsequent expression and activation of MMP-9. This activation is an essential requirement for the invasive process.

As metaloproteinasas 2 y 9 (MMP-2 y MMP-9) e o inibidor-1 de MMPs (TIMP-1) poderiam contribuir à regulação do comportamento invasivo das células trofoblásticas, efeito que poderia ser mediado pelo Factor de Crescimento Similar à Insulina tipo II (IGF-II), o qual regula o desenvolvimento e função do trofoblasto na interface materno-fetal. O objectivo deste estudo foi investigar o papel da via de sinalização PI3K/AKT activada por IGF-II na expressão de MMP-2 e MMP-9 envolvidos no processo de invasão na linha celular JEG-3, de coriocarcinoma humano. A expressão do mARN de MMP-2, MMP-9 y TIMP-1, foi avaliada, em ditas células, pela técnica de RT-PCR utilizando diferentes doses de IGF-II e diferentes condições, enquanto que a via de sinalização foi avaliada usando a técnica de Western-blot. Foi encontrado que o IGF-II não contribui à proliferação das células trofoblásticas, no entanto, este promoveu a expressão do mARN de MMP-9 e TIMP-1 mas não de MMP-2, de forma dependente da dose. O efeito na expressão de MMP-9 é mediado através de IGF-II pela activação da via de sinalização PI3K/AKT depois da fosforilação do receptor de IGF-I (IGF-IR). De acordo aos resultados é proposto um modelo, no qual a interacção de IGF-II com IGF-IR conduz à activação de PI3K/AKT e à subsequente expressão e activação de MMP-9. Esta activação é um requisito essencial para o processo invasivo.

[Role of the cytokine-3 signaling suppressor protein (SOCS 3) in growth hormone resistance induced by malnutrition]. / Papel de la proteína supresora de la señalización por citocinas-3 (SOCS 3) en la resistencia a la hormona de crecimiento inducida por malnutrición.

Nutrition is an important regulator of growth hormone (GH) action. Nutritional deprivation causes a GH resistance involving post-receptor alterations in the signaling pathway, but the responsible mechanisms remain unknown. Herein, suppressors of cytokine signaling proteins (SOCS) were investigated as potential agents in GH-resistance induced by malnutrition which inhibits activation of Janus kinase 2/signal transductor and activator of transcription 5 (JAK2/STAT5) pathway. Growth hormone receptor (GHR), IGF-I and SOCS3 mRNA expression was measured in the liver of rats fed with a low protein diet and with GH stimulation. Protein diet restriction significantly diminished GHR mRNA and receptor binding sites (p < 0.05), but caused a highly increased SOCS3 gene expression. In diet-restricted rats, GH administration increased GHR and IGF-I mRNA; however, GHR reached basal levels observed in animals feeding with a high protein diet. The malnourished group increased SOCS3 gene transcription in response to GH administration. These results suggested that a reduced hepatic sensitivity to GH was associated with SOCS3 over-expression. In addition, ubiquitous distribution of SOCS3 and CIS suggests a role for SOCS proteins as tissue specific modulators of cytokine sensitivity.

Papel de la proteína supresora de la señalización por citocinas-3 (SOCS 3) en la resistencia a la hormona de crecimiento inducida por malnutrición / Role of suppressor of cytokine signaling proteins in growth hormone resistance induced by malnutrition

La nutrición es un regulador importante de las acciones de la hormona de crecimiento (GH). Se ha demostrado que el déficit de nutrientes induce un estado de resistencia a la hormona, en el cual están involucrados, entre otros factores, alteraciones post-receptor en la vía de señalización, pero se desconocen los mecanismos responsables. En este trabajo se investigó la participación de algunos miembros de la familia de proteínas supresoras de la señalización por citocinas (SOCS) en la resistencia causada por malnutrición, que inhibe la activación de la señalización a través de Janus cinasa 2/transductor de señal y activador de la transcripción 5 (JK2/STAT5). Se estudiaron los cambios en la expresión génica del receptor de GH (RGH), IGF-I y SOCS3 en el hígado de ratas alimentadas con una dieta baja en proteína (8 por ciento) y estimuladas con GH. La restricción en el consumo de proteína disminuyó significativamente (p<0,05) los contenidos de ARNm del RGH al igual que el número de sitios receptores, pero elevó significativamente (p<0,05) la transcripción del gen SOCS3. La administración de hormona de crecimiento humana recombinante (rhGH) a ratas restringidas en proteína incrementó los niveles del mensajero del RGH y del IGF-I, pero sólo para el primero se lograron restablecer valores comparables a los de animales alimentados con una dieta alta en proteína (20 por ciento). La transcripción de SOCS3 en el grupo malnutrido se incrementó aún más como resultado de la administración de GH. En resumen, los resultados obtenidos sugieren que la reducción en la sensibilidad del tejido hepático a la GH que acompaña la malnutrición puede deberse en parte a una sobreexpresión de la proteína SOCS3. Además, la distribución ubicua de SOCS3 y CIS plantea un papel más amplio de las proteínas SOCS como reguladoras de la sensibilidad de los tejidos a las citocinas.

Obtención y caracterización de un anticuerpo específico contra la hormona luteinizante humana / Obtention and characterization of a specific antibody against human luteinizing hormone

En el presente trabajo se describe la obtención del anticuerpo policlonal específico contra la hormona luteinizante humana (HL). la Hormona fue purificada a partir de una fracción rica en glicoproteínas, obtenida de hipófisis humanas, siguiendo el método desarrollado previamente en el proyecto basado en diferencias de solubilidad y constante dieléctrica entre las diferentes proteínas. El antisuero específico se obtuvo por inoculación del antígeno en conejos raza Nueva Zelanda y su producción controlada valorando el título por RIA. La caracterización parcial del antisuero se realizó mediante la determinación del título óptimo, afinidad, especificidad y su aplicabilidad para la cuantificación en términos de curva estándar y control de calidad, en comparación con un antisuero de referencia internacional. Los resultados indicaron que el anticuerpo obtenido puede emplearse en la cuantificación del HL por RIA